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人結腸癌紫杉醇耐藥株的傳代方法介紹
更新時間：2016-08-26 點擊次數：1859次
人結腸癌紫杉醇耐藥株傳代方法：
收到細胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個人結腸癌紫杉醇耐藥株生長情況。
（一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，換10ml新鮮培養液后繼續培養。
(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養。具體步驟如下：
1.棄去培養液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。
2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養瓶中，倒放于37℃培養箱1-3分鐘預熱，之后翻轉培養瓶10-30秒，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量*培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加*培養基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養瓶中。如果沒有特別說明，收到細胞后的*次傳代一般是一傳二。
注：1、觀察細胞在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X或20X物鏡下。
2、瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養基，細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。
3、有些細胞貼壁不牢，如發現貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內。
4、收到細胞后，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們。
